GST标签载体，pGEX-6P-1和pGEX-4T-1的区别

软件 2024-03-27

请问有人知道基因克隆载体中PGEX的特点吗？

pgex特点就是带有GST标签，可以增加目的蛋白的溶解度，别的没什么特点，属于大众型载体，目前也较常使用。你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊，不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带，至于形不形成包涵体就取决于你的iptg浓度和诱导温度了，iptg越低，温度越低可溶性越好，我们曾做过0.1的iptg，4度诱导过夜的。因为pgex载体是不能变性复性的，因为GST标签的活性会发生改变。如果是全菌都没有表达，首先检查是不是你插入序列的问题，排出后看看是不是稀有密码子的问题，真核基因在原核细胞中表达会受到大肠杆菌稀有密码子的影响，网上有分析软件。如果稀有密码子比较多可以使用rosetta菌

4T-1 载体GST在基因的上游还是下游

pGEX-4T-1载体是一种常用的原核表达载体，具有Amp抗性，质粒大小为4.9kb。该载体多克隆位点区域含有多个常用的内切酶位点序列，便于不同基因的克隆；且全序列中含有tac启动子、GST标签序列，GST标签位于融合基因的N端，是一种高效的蛋白表达载体。Tac启动子在没有诱导物存在的情况下，质粒上携带的lacIq基因产物可以有效抑制tac启动子的转录。可在BL21、Rosstea等表达菌株中高表达融合有GST标签的蛋白，且用凝血酶可将目的蛋白的GST标签切掉，便于下游蛋白纯化。质粒图谱如下：